鼠抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體的鑒定與應(yīng)用

　更新時間：2020-04-22 點(diǎn)擊量：863

　　鼠抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體存在于谷物、堅(jiān)果、棉花籽及其他食品或飼料中，具有很強(qiáng)的致癌性，對人和若干動物具有強(qiáng)烈的毒性，其毒性作用主要是對肝臟的損害。本抗體為黃曲霉毒素B1單克隆抗體，該抗體可應(yīng)用于ELISA、膠體金、免疫親和柱層析等免疫檢測。

　　鼠抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體的鑒定：

　　(1)亞類鑒定：收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，用免疫雙擴(kuò)散法鑒定免疫球蛋白亞類。

　　(2)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清及腹水效價測定：用濃度為2.5mg/L的AFB-OVA包被酶標(biāo)板，用間接ELISA法分別測出雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清及腹水效價。

　　(3)抗體親和力常數(shù)測定：采用下面公式計(jì)算親和常數(shù)Ka=(n--1)/(nA'-An).

　　Ka：相對親和常數(shù)，A：包被抗原濃度為Ap時的半數(shù)吸光度，Ab：包被抗原濃度為Ag時的半數(shù)吸光度，n：Ag'與A。的比值

　　(4)抗體對標(biāo)準(zhǔn)毒素的靈敏度：首先確定3B3抗體的ELISA的反應(yīng)條件，然后采用間接競爭法測定不同濃度的AFB1對抑制后的A值，抑制率=A/AoX100%，其中AO為優(yōu)化條件下的吸光值繪制抑制率曲線，以抑制率50%時的AFB1的濃度為抗體檢測AFB的靈敏度。

　　(5)抗體特異性檢測：采用間接競爭法測定3種McAb與黃曲霉毒素Br，G，G2，M，的交叉反應(yīng)。

　　鼠抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體的應(yīng)用：

　　將純化濃縮后的抗體與羧基微球在4C條件下偶聯(lián)14h，然后填充親和柱，將一系列濃度的黃曲霉毒素B標(biāo)樣過親和柱，用75%甲醇洗脫后，用熒光光度計(jì)檢測單克隆抗體免疫親和柱截留的黃曲霉毒素B1。

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